Nuestros métodos de operación, detalles y explicaciones teóricas se convertirán en las pautas para su operación, como la colocación de soluciones nutritivas y frascos de células; procedimientos de esterilización; Para aprender su correcto funcionamiento, es necesario prestarles atención la primera vez.
Nutrir células como criar niños
Las células son realmente frágiles. Lo mejor es revisarlo todos los días para prevenir fenómenos anormales como falta de agua, dióxido de carbono, corte de energía y temperatura insuficiente en la incubadora. También es necesario resolver estos accidentes a tiempo para evitar mayores dolores causados por experimentos repetidos. .
Las buenas células deben sembrarse a tiempo.
Las células se pasan en lotes, de modo que incluso si falla un lote, hay un repuesto. Puede que no sea fácil para la persona promedio como este último. Pero esta es la lección de mi sangre. Una vez contaminadas las celdas, todo el ejército fue aniquilado. En ese momento, lamento no haber protegido la semilla.
Cada celda tiene sus propias características y debe tratarse de manera diferente.
Las células son iguales a las de los humanos, y diferentes células tienen diferentes características de cultivo. Tenga cuidado en el proceso de cultivo. Diferentes líneas celulares usan diferentes medios y sueros.
Por ejemplo, las células del músculo liso que crio son muy activas y les gusta estar animadas. En 2-3 días, habrá una gran población y no me gusta comer ni beber mucho. Es realmente el mejor niño para criar. Las células endoteliales y las células del músculo liso tienen personalidades similares, pero son muy antihigiénicas y descuidadas. Contienen muchas células secretoras, por lo que deben cambiarse y lavarse con frecuencia. Las células RAW264.7 también son muy alegres y muy comestibles. Es necesario alimentarlos a menudo. El dolor de cabeza es que las células se activan fácilmente. Es bueno que el biberón y el ambiente en el que se cultivan estén libres de endotoxinas, pero a mí como madre me cuesta satisfacerlas.
Preparación para el trabajo antes del entrenamiento.
Incluyendo el manejo de consumibles, la configuración de reactivos, pruebas de esterilidad, etc.
Limpieza de cristalería. Para la cristalería (botella de células, botella que contiene solución nutritiva, botella pequeña de penicilina, etc.), primero use detergente en polvo para limpiar (preste atención a las esquinas muertas) y luego enjuague. Remoje en solución ácida durante más de 24 horas, luego enjuague con agua limpia 10 veces para eliminar la solución ácida residual. Las botellas, etc., se agitan vigorosamente durante el enjuague. Luego se remojaron en agua bidestilada durante 24 h. Después del secado, envuélvalo y séquelo a 160 grados durante 2 horas.
Configuración de reactivos. Como líquido para el cultivo celular, generalmente, se puede usar más de agua doblemente destilada. Y preste atención al ajuste del valor de pH.
Pruebas de esterilidad. Utilice principalmente esterilización por filtro: como tripsina, antibióticos, solución G-418, varios medios, piruvato de sodio, glutamina, etc. Algunos pueden esterilizarse en autoclave: PBS, D-Hank, etc.
Los reactivos se almacenan en alícuotas
Incluyendo solución nutritiva, pancreatina, suero, etc.
El suero es especialmente importante. El suero debe almacenarse a -20 grados. Si no se puede usar una botella a la vez, se pueden dispensar 40-50ml en botellas estériles tratadas con ácido, o incluso almacenarse en botellas de penicilina. Generalmente, el suero proporcionado por el fabricante es estéril y no requiere filtración estéril. Si se encuentra mucha materia en suspensión en el suero, el suero puede agregarse al medio y filtrarse juntos, y el suero no debe filtrarse directamente. (Sin efecto sobre el cultivo celular en circunstancias normales)
El suero embotellado debe descongelarse gradualmente: el refrigerador de 4 grados se disuelve por completo y luego se divide en envases. Durante el proceso de disolución, se debe agitar regularmente (cuidado para que no se formen burbujas de aire) para uniformar la temperatura y la composición y reducir la probabilidad de precipitaciones. No descongele directamente de -20 grados a 37 grados, ya que la temperatura cambia demasiado, lo que puede causar fácilmente la coagulación y precipitación de proteínas.
La inactivación por calor se refiere a calentar el suero completamente descongelado a 56 grados durante 30 minutos. Después de que el baño de agua suba a 56 grados, coloque el suero, espere a que la temperatura suba a 56 grados y cuente el tiempo, generalmente agítelo uniformemente una vez cada 5 minutos más o menos. El propósito de este tratamiento térmico es desactivar los componentes del complemento en el suero. A menos que sea necesario, este tratamiento térmico generalmente no se realiza porque causará un aumento significativo en el sedimento y afectará la calidad del suero. Preste atención al efecto de cambiar el suero (incluyendo diferentes lotes) en las células.
Fuerte sensación de esterilidad.
Antes del experimento, el banco ultralimpio se esterilizó mediante irradiación con luz ultravioleta durante 30 minutos, la superficie de operación aséptica se limpió con etanol al 70 % y el ventilador del banco ultralimpio se encendió durante unos minutos antes de iniciar la operación experimental. .
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