Requisitos básicos para la recolección de muestras
1. Las muestras de casos hospitalizados son recolectadas por el personal médico del hospital donde están ubicadas, y las muestras de contactos cercanos son recolectadas por la agencia local designada para el control de enfermedades y la institución médica. Al recolectar especímenes, se deben establecer diferentes áreas de muestreo de acuerdo con los diferentes objetos de recolección. Los pacientes con fiebre van a las clínicas de fiebre para recibir tratamiento y tomar muestras. Las instituciones que no tienen clínicas de fiebre deben establecer áreas especiales de muestreo para pacientes con fiebre y tomar muestras de pacientes con fiebre y otros grupos de prueba para evitar intersecciones. infección. 2. Las personas infectadas asintomáticas, el personal de entrada y los contactos cercanos deben recolectar hisopos nasofaríngeos para realizar pruebas de ácido nucleico durante el aislamiento y la observación. Se deben recolectar dos muestras de frotis nasofaríngeos al mismo tiempo cuando se libera el aislamiento, y se deben usar diferentes reactivos de detección de ácido nucleico para la prueba, respectivamente. En principio, las pruebas secundarias las llevan a cabo diferentes instituciones de prueba. 3. De acuerdo con las necesidades de las pruebas clínicas y de laboratorio, se pueden tomar múltiples muestras durante la hospitalización y el aislamiento, y se pueden recolectar múltiples muestras como el tracto respiratorio, sangre y heces al mismo tiempo. El personal de muestreo debe seguir estrictamente las especificaciones de muestreo para recolectar las muestras y asegurarse de que la calidad de las muestras recolectadas cumpla con los requisitos. Al mismo tiempo, deben registrar la información del examinado en detalle y pueden usar el escaneo de códigos de barras y otros métodos de información para recopilar información relevante. 4. Para el cribado de la población, los tubos de muestreo deben determinarse de acuerdo con los requisitos de los reactivos utilizados para la extracción y detección de ácidos nucleicos, y se pueden seleccionar tubos de muestreo que contengan agentes inactivadores de virus (sales de guanidina o tensioactivos, etc.). La muestra utilizada para el aislamiento del virus debe colocarse en un tubo de muestreo que no contenga un agente inactivante del virus. 5. Los elementos y el monitoreo ambiental deben basarse en los propósitos de monitoreo y las necesidades de prevención y control para determinar los elementos de muestreo, la ubicación y la cantidad, el muestreo debe seguir estrictamente las especificaciones de muestreo.
(4) Tipos de especímenes recolectados. Cada caso debe recolectar muestras del tracto respiratorio agudo (incluidas las muestras del tracto respiratorio superior o las del tracto respiratorio inferior). En casos severos, primero se recolectarán muestras de las vías respiratorias inferiores; Se pueden recolectar muestras de heces, muestras de sangre completa, muestras de suero y muestras fecales de acuerdo con las necesidades clínicas. Muestra de orina. Los artículos y las muestras ambientales se recogen de acuerdo con los requisitos de seguimiento.
Tipos de muestras: 1. Muestras del tracto respiratorio superior: incluidos hisopos nasofaríngeos, frotis de garganta, etc. 2. Muestras del tracto respiratorio inferior: esputo de tos profunda, líquido de lavado alveolar, líquido de lavado bronquial, aspirado de las vías respiratorias, etc. 3. Muestras de heces / anal hisopos: se deben recolectar unos 10 gramos (del tamaño de un maní). Si no es conveniente conservar las muestras de heces, se pueden recolectar hisopos anales. 4. Muestra de sangre: sangre anticoagulante, el volumen de recolección es de 5 ml, se recomienda utilizar un vaso sanguíneo al vacío que contenga anticoagulante EDTA para recolectar sangre. 5. Muestras de suero: intente recolectar muestras de suero doble durante las fases aguda y de recuperación. El primer suero debe recolectarse lo antes posible (preferiblemente dentro de los 7 días posteriores al inicio de la enfermedad), y el segundo suero debe recolectarse en las 3 a 4 semanas posteriores al inicio de la enfermedad. El volumen de recogida es de 5 ml y se recomienda utilizar un tubo de recogida de sangre al vacío sin anticoagulante. Las muestras de suero se utilizan principalmente para la determinación de anticuerpos y no para la detección de ácidos nucleicos. 6. Muestra de orina: recolecte la orina de media mañana, el volumen de recolección es de 2 ~ 3 ml. 7. Muestras de superficie: incluidos los alimentos importados de la cadena de frío o los productos importados en las superficies internas y externas del empaque, así como las herramientas de transporte y almacenamiento y otras partes que puedan estar contaminadas por la recolección de frotis. 8. Muestras de aguas residuales: de acuerdo con la distribución del sistema de drenaje de los sitios de procesamiento y tratamiento de productos congelados importados a gran escala en el puerto marítimo, concéntrese en seleccionar la salida de aguas residuales, la recolección de la red interna de tuberías, la corriente descendente del flujo de aguas residuales o la conexión con la red municipal de tuberías, etc. De 2 a 3 puntos Se muestrean bits.
(4) Recolección y procesamiento de muestras
1. Hisopo nasofaríngeo: el muestreador sostiene suavemente la cabeza de la persona que se va a recolectar con una mano y sujeta el hisopo con la otra. El hisopo entra en la fosa nasal y avanza lentamente a lo largo de la parte inferior del conducto nasal inferior. Debido a que el pasaje nasal está curvado, no es aceptable. Fuerza excesiva para evitar hemorragias traumáticas. Cuando la punta del hisopo llegue a la pared posterior de la cavidad nasofaríngea, gírela suavemente durante una semana (en caso de tos refleja, quédese un rato), luego saque lentamente el hisopo y sumerja la cabeza del hisopo en 2 ～ 3 ml. solución de conservación de virus (también se puede utilizar solución salina isotónica, líquido de cultivo de tejidos o tampón de fosfato), deseche la cola y enrosque la tapa con fuerza.
2. Hisopo faríngeo: la persona que se recolecta debe enjuagarse la boca con solución salina normal, y la persona que toma el muestreo debe humedecer el hisopo en solución salina estéril (está prohibido poner el hisopo en la solución de conservación del virus para evitar que los antibióticos causen alergias), y el persona que está siendo recogida Incline la cabeza ligeramente, abra la boca y haga un" ah" sonido, exponiendo las amígdalas en ambos lados, coloque el hisopo en la base de la lengua, limpie las amígdalas en ambos lados de la persona con un poco de fuerza durante al menos 3 veces, y luego limpie hacia arriba y hacia abajo la faringe posterior durante al menos 3 veces. A continuación, sumerja la cabeza del hisopo en un tubo que contenga de 2 a 3 ml de solución de conservación de virus (también se puede usar solución salina isotónica, líquido de cultivo de tejidos o solución tampón de fosfato), deseche la cola y enrosque bien el tapón del tubo. El hisopo de garganta también se puede colocar en el mismo tubo que el hisopo nasofaríngeo.
3. Extracto nasofaríngeo o del tracto respiratorio: Utilice un colector conectado a una bomba de presión negativa para extraer el moco de la nasofaringe o las secreciones respiratorias de la tráquea. Inserte la cabeza del colector en la cavidad nasal o tráquea, encienda la presión negativa, gire la cabeza del colector y retírelo lentamente, recoja el moco extraído y enjuague el colector una vez con 3 ml de líquido de muestreo (también puede usar un pediátrico catéter conectado a una jeringa de 50 ml (colector alternativo).
4. Esputo con tos profunda: después de que el paciente tenga tos profunda, recoja el esputo tosido en un tubo de muestreo que contenga 3 ml de líquido de muestreo. Si el esputo no se recoge en el líquido de muestreo, se pueden agregar de 2 a 3 ml del líquido de muestreo antes de la prueba, o se puede agregar un volumen igual de jugo digestivo de esputo. La fórmula de la solución de almacenamiento de jugo digestivo de esputo se muestra en la Tabla 1.
Cuando la use, diluya la solución de almacenamiento a 50 ml con agua desionizada, mézclela con el mismo volumen de esputo, o consulte las instrucciones de uso del reactivo, o use un volumen igual de esputo con 1 g / L de tampón de fosfato que contenga proteinasa K para convertir el esputo.
5. Líquido de lavado bronquial: inserte la cabeza del recolector de la fosa nasal o la cavidad traqueal en la tráquea (aproximadamente 30 cm de profundidad), inyecte 5 ml de solución salina normal, active la presión negativa, gire la cabeza del recolector y retire lentamente, recoja el moco extraído, Y enjuague el colector con la solución de muestreo una vez, o puede usar un catéter pediátrico conectado a una jeringa de 50 ml para reemplazar la colección.
6. Líquido de lavado alveolar: después de la anestesia local, inserte el broncoscopio de fibra óptica a través de la boca o la nariz a través de la faringe hasta el bronquio del lóbulo medio derecho o el segmento lingual del pulmón izquierdo, y golpee la parte superior en la abertura de la rama bronquial y agréguelo lentamente a través del orificio de biopsia traqueal. Solución salina fisiológica bacteriana, 30-50 ml cada vez, total 100-250 ml, no debe exceder los 300 ml.
7. Muestra de heces: Tome 1 ml de solución de procesamiento de muestras, recoja la muestra de heces del tamaño de una semilla de soja y agréguela al tubo, sople y chupe suavemente de 3 a 5 veces, déjela reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos, centrifugue a 8000 rpm durante 5 minutos y absorber el sobrenadante. Detección. La solución de tratamiento de muestras fecales se puede preparar por sí sola, y la fórmula se muestra en la Tabla 2.
La solución de HANK' S u otra solución salina isotónica, líquido de cultivo de tejidos o solución tampón de fosfato también se puede utilizar para disolver la muestra de heces y preparar una suspensión de heces. Si el paciente tiene síntomas de diarrea, tome de 3 a 5 ml de muestra fecal, pipetee suavemente para mezclar, centrifugue a 8000 rpm durante 5 minutos y absorba el sobrenadante para su uso.
8. Hisopo anal: use un hisopo de algodón estéril para insertarlo suavemente en el ano 3 ～ 5 cm, luego gírelo suavemente, colóquelo inmediatamente en un tubo de muestreo con tapón de rosca exterior de 15 ml que contiene 3 ～ 5 ml de solución de conservación de virus, deseche la cola, y rotarlo. Apriete la tapa del tubo.
9. Muestras de sangre: se recomienda utilizar tubos de extracción de sangre al vacío que contengan anticoagulante EDTA para obtener muestras de sangre de 5 ml. De acuerdo con el tipo de reactivos de extracción de ácidos nucleicos seleccionados, utilice sangre completa o plasma para la extracción de ácidos nucleicos. Para separar el plasma, centrifugue la sangre completa a 1500-2000 rpm durante 10 minutos y recoja el sobrenadante en un tubo de plástico con tapa de rosca estéril.
10. Muestra de suero: Recoja 5 ml de muestra de sangre con un tubo de extracción de sangre de presión negativa al vacío, déjelo a temperatura ambiente durante 30 minutos, centrifugue a 1500-2000 rpm durante 10 minutos y recoja el suero en un tubo de plástico estéril con tapón de rosca.
11. Muestras de superficie: Consulte el método recomendado en las" Especificaciones técnicas para el monitoreo ambiental del nuevo coronavirus en el mercado agrícola (Comercio de mercado)" (WS / T776—2021). Una vez que el hisopo de muestreo esté completamente infiltrado con la solución de conservación de virus, aplíquelo nuevamente a la superficie y luego aplique el hisopo. Vuelva a colocarlo en el tubo de muestreo y sumérjalo, sáquelo y aplique la muestra nuevamente, repita más de 3 veces. El muestreo distribuido multipunto se realiza en objetos con grandes superficies.
12. Muestras de aguas residuales: Consulte los métodos recomendados en" Especificaciones técnicas para el monitoreo ambiental del nuevo coronavirus en el mercado agrícola (Comercio de mercado)" (WS / T776—2021). Al recolectar una muestra de hisopo de aguas residuales, sumerja el hisopo en las aguas residuales adsorbidas y retire el hisopo. Vuelva a poner el tubo de muestreo en remojo, sáquelo y sumérjalo en las aguas residuales nuevamente, repita más de 3 veces y realice un muestreo distribuido multipunto para cada ubicación de muestreo de aguas residuales. Al recolectar muestras de aguas residuales, use botellas de plástico de polietileno para recolectar 1L ～ 1.5L de aguas residuales. Para la recolección de aguas residuales de más de 1,5 l, puede utilizar baldes de plástico de polietileno o equipo de enriquecimiento especial para las muestras de agua en el lugar. Antes de recolectar muestras de aguas residuales, deben mezclarse completamente y luego tomarse muestras; si las aguas residuales son difíciles de mezclar bien y se produce una estratificación, el muestreo se puede realizar en capas de acuerdo con la proporción del volumen de agua de cada capa.
13. Otros materiales: recolectar de acuerdo con los requisitos y especificaciones de diseño.
(5) Embalaje de muestras
Una vez recolectadas las muestras, se subenvasan en la cabina de seguridad biológica del laboratorio de seguridad biológica de segundo nivel.
1. Todas las muestras deben colocarse en un tubo de recogida de muestras de tamaño adecuado con tapón de rosca y una junta en el interior, que sea resistente a la congelación, y apretarse. El número de muestra, tipo, nombre y fecha de muestreo se indican en el exterior del recipiente. 2. Coloque las muestras selladas en una bolsa sellada, cada bolsa está limitada a una muestra. Los requisitos de empaque de la muestra deben cumplir con los estándares correspondientes de las" Reglas Técnicas para el Transporte Seguro de Mercancías Peligrosas por Aire" ;. 3. Cuando se trate de transporte de especímenes externos, se realizará un empaque de tres capas según el tipo de especímenes y las sustancias infecciosas de Clase A o Clase B.
(6) Conservación de especímenes
Las muestras utilizadas para el aislamiento de virus y la detección de ácidos nucleicos deben analizarse lo antes posible. Las muestras que se pueden analizar en 24 horas se pueden almacenar a 4 ° C; las muestras que no puedan detectarse en 24 horas deben almacenarse a -70 ° C o menos (si no es así, conservar a 70 ° C en un refrigerador a -20 ° C). Las muestras de suero se pueden almacenar a 4 ° C durante 3 días y se pueden almacenar durante mucho tiempo por debajo de -20 ° C. Deben establecerse bibliotecas especiales o contadores especiales para almacenar las muestras por separado.
(7) Envíe las muestras para su inspección.
Las muestras deben enviarse al laboratorio lo antes posible después de la recolección, y las muestras no deben colocarse a temperatura ambiente (25 ° C) durante más de 4 horas después de la recolección. Si se requiere transporte de larga distancia, se recomienda utilizar hielo seco y otros métodos de refrigeración para el almacenamiento. Evite la congelación y descongelación repetidas durante el transporte de la muestra.
1. Envíe muestras
Todos los casos originales o tempranos de las epidemias locales descubiertos en varias provincias (comunidades autónomas y municipios), casos clave relacionados con la epidemiología de los primeros casos, casos locales con focos de infección desconocidos, casos importados del exterior, bienes importados y relacionados con el medio ambiente. muestras positivas, etc. Se deben recolectar al menos 2 muestras en paralelo, una se envía a cada agencia provincial de control de enfermedades para su análisis, la otra se envía a los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de China para su análisis y revisión, y un formulario de envío de muestras se adjunta (ver Apéndice 10-1). Las nuevas cepas representativas aisladas de varias provincias deben enviarse sin demora a los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de China para su revisión y conservación.
2. Transporte de muestras y cepas
(1) El transporte nacional de nuevas cepas de coronavirus u otros materiales biológicos potencialmente infecciosos se clasifica como Clase A, y el número ONU correspondiente es UN2814. El embalaje se ajusta a la clasificación PI620 del documento de la OACI Doc9284" Instrucciones técnicas para el transporte seguro de mercancías peligrosas por vía aérea" Requisitos de embalaje: Las muestras ambientales pertenecen a la categoría B y el número ONU correspondiente es UN3373. El embalaje cumple con los requisitos de clasificación PI650 del documento de la OACI Doc9284" Normas técnicas para el transporte seguro de mercancías peligrosas por vía aérea" ;; Se puede hacer referencia al embalaje estándar anterior para su transporte por otros medios de transporte. El transporte de nuevas cepas de coronavirus u otros materiales potencialmente infecciosos debe realizarse de acuerdo con las" Regulaciones administrativas sobre el transporte de especies o muestras de microorganismos altamente patógenos (virus) que pueden infectar a seres humanos" (anteriormente Orden Nº 45 del Ministerio de Salud) para el" Certificado de permiso de transporte" .
(2) Transporte internacional Los especímenes o cepas del nuevo coronavirus que se transporten internacionalmente deberán ser empaquetados de manera estandarizada, pasar por los procedimientos pertinentes de acuerdo con el" Reglamento sobre la Administración de Sanidad y Cuarentena de Entrada y Salga de Artículos especiales" y cumpla con los requisitos nacionales e internacionales pertinentes.
(3) Recepción y manejo de muestras y cepas de virus. Las muestras transportadas por vía aérea llegan al aeropuerto de destino y son transportadas por vehículos de transporte profesionales hasta la unidad receptora. Los ejemplares transportados por tierra son transportados en vehículos profesionales. Los transportistas y receptores se ocuparán de los ejemplares. Doble signo de recepción. Los especímenes y cepas del nuevo coronavirus deben ser manejados por una persona dedicada, registrar con precisión el registro de origen, tipo, cantidad y número de los especímenes y cepas, tomar medidas efectivas para garantizar la seguridad de las cepas y muestras y prevenir estrictamente mal uso, uso malintencionado, hurto y hurto. Robo, pérdida, fuga y otros incidentes.
02
Pruebas de laboratorio del nuevo coronavirus
