A menudo hay problemas de un tipo u otro en el proceso de cultivo celular. No subestimes el cultivo celular, pero contiene preguntas universitarias. Al comunicarse con los usuarios, encontrará muchos problemas que se pueden evitar. Los siguientes son comunes en el proceso de cultivo celular. Analizar la causa de la anormalidad.
placa de Petri
1. Las células cultivadas no se adhieren a la pared
razón posible
1. Digestión excesiva de tripsina;
2. Contaminación por micoplasma;
3. El valor de pH del medio es demasiado alcalino (descomposición de NaHCO3);
4. Envejecimiento celular;
5. La concentración inicial de células inoculadas es demasiado baja o demasiado alta.
Solución
1. Acortar el tiempo de digestión de tripsina o reducir la concentración de tripsina;
2. Aislar el cultivo y detectar micoplasma. Limpie el soporte o la incubadora. Si se encuentra contaminación por micoplasma, deseche el cultivo;
3. Use una solución de ácido acético estéril para ajustar el pH o llene con CO2 estéril;
4. Habilitar nuevas celdas de conservación;
5. Ajuste la concentración óptima de células inoculadas.
2. Agrupación de células en suspensión
razón posible
1. El medio de cultivo contiene iones de calcio y magnesio;
2. Contaminación por micoplasma;
3. La sobredigestión por proteasa provoca la lisis celular;
4. Contaminación del ADN.
Solución
1. Lave las células con una solución salina equilibrada sin calcio ni magnesio, y sople y succione suavemente
2. Las células obtienen una suspensión de una sola célula;
3. Separar el cultivo y detectar micoplasma;
4. Tratamiento de células con ADNasel.
3. Las células cultivadas crecen lentamente
razón posible
1. Por sustitución de medio de cultivo o suero diferente;
2. Algunos componentes necesarios para el crecimiento celular en el medio de cultivo, como la glutamina o los factores de crecimiento, están agotados o faltan o han sido destruidos;
3. Hay una pequeña cantidad de contaminación bacteriana o fúngica en el cultivo;
4. Almacenamiento inadecuado de reactivos;
5. La concentración inicial de células inoculadas es demasiado baja;
6. Las células han envejecido;
7. Contaminación por micoplasma.
Solución
1. Compare la composición del medio nuevo y el medio original, compare el suero nuevo y el suero antiguo para apoyar los experimentos de crecimiento celular y deje que las células se adapten gradualmente al nuevo medio;
2. Cambie a medio de cultivo recién preparado o agregue glutamina y factores de crecimiento;
3. Use un medio de cultivo libre de antibióticos para el cultivo, si se encuentra contaminado, deseche el cultivo;
4. El suero debe almacenarse a -10 a -20 grados. El medio de cultivo debe almacenarse a 2-8 grados en la oscuridad. El medio de cultivo completo que contiene suero debe almacenarse a 2-8 grados y debe consumirse dentro de 1 semana;
5. Aumentar la concentración inicial de células inoculadas;
6. Cambiar a una nueva celda de conservación;
7. Aislar el cultivo y detectar micoplasma. Limpie el soporte y la incubadora. Si se encuentra contaminación por micoplasma, deseche el cultivo.
Cuarto, las células cultivadas crecen mal.
razón posible
A. El estado de la propia célula.
1. El número de pasajes celulares es grande y las células están envejeciendo;
2. Cantidad de inoculación celular: cantidad de inoculación demasiado baja, crecimiento celular lento;
3. El paso de las células es demasiado tarde: envenenamiento celular, que afecta el crecimiento de las células después del paso;
4. El tiempo de digestión de la tripsina es demasiado largo o demasiado corto: si el tiempo es demasiado largo, las células mueren; si el tiempo es demasiado corto, las células no se separan completamente en grupos y mueren;
5. Criopreservación y recuperación de células: congelación lenta y lisis instantánea.
B. Contaminación
1. Contaminación por micoplasma;
2. Contaminación por moho.
C, medio de cultivo o suero
1. Sin validación antes del reemplazo de suero o medio;
2. Si el medio seleccionado es adecuado;
3. Si la preparación del medio es apropiada;
4. Si la preparación del medio es precisa.
D. para cultivar el medio ambiente
1. ¿Es normal el suministro de CO2?
2. La temperatura de la incubadora o agitador está debidamente controlada.
De acuerdo con las cuatro posibles razones anteriores, cree soluciones específicas
1. Preste atención al estado de las células: como el número de pases, la cantidad de inoculación, etc.;
2. Evitar la contaminación (usar suero regular, legal y rastreable);
3. Usar suero o medio apropiado, preferiblemente verificado;
4. Preste atención al entorno del laboratorio.
Posibles causas de muerte celular en cultivo
1. No hay CO2 en la incubadora;
2. La temperatura en la incubadora fluctúa demasiado;
3. Las células se dañan durante la crioconservación o la recuperación;
4. La presión osmótica del medio de cultivo es incorrecta;
5. Acumulación de metabolitos tóxicos en el medio de cultivo.
Solución
1. Detectar CO2 en la incubadora;
2. Verifique la temperatura en la incubadora;
3. Tomar una nueva especie celular preservada;
4. Detectar la presión osmótica del medio de cultivo;
5. Cambiar a medio de cultivo fresco;
