Necesitamos lavar el kit de ocho tubos de PCR después de usarlo. Hay algunas formas de limpiar el PCR Octal Kit. ¿A qué debo prestar atención cuando lo uso?
Principio del método experimental: la membrana de gel de sílice se une al ADN en condiciones de alto contenido de sal y se separa del ADN en condiciones de bajo contenido de sal. Los cebadores, mononucleótidos, enzimas, aceite mineral, iones de sal, etc. se separan en la solución de lavado que contiene ADN, ya que no tienen propiedades similares al ADN.
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1. El fabricante de ocho tubos de PCR habla sobre la composición, el almacenamiento y la estabilidad del kit.
1. Instrucciones, consumibles: 96-placa de preparación de ADN de pocillos, 96-placa de pocillos profundos de 1,6 ml de pocillos, 96-placa de pocillos en forma de V.
2. Tampón PCR-A: solución de unión a ADN. Almacenar bien cerrado a temperatura ambiente. Si se produce precipitación, debe disolverse en un baño tibio a 65 grados y enfriarse a temperatura ambiente antes de su uso.
3. Concentrado de tampón W2: eliminar la solución salina. Antes de usar, agregue etanol al volumen especificado en la botella, mezcle bien y almacene a temperatura ambiente. Se puede usar etanol al 100 por ciento o etanol absoluto al 95 por ciento.
4. Eluyente: Tris-HCl 2,5 mM, pH 8,5, almacenado en estado sellado a temperatura ambiente.
2. El fabricante de tubos PCR de ocho acoplamientos habla sobre los pasos de operación
Los usuarios pueden elegir presión negativa o centrifugación.
A. Método de presión negativa
1. Conecte correctamente el dispositivo de presión negativa, coloque la 96-placa de preparación de ADN del pocillo en el dispositivo de presión negativa; añadir 3 veces el tampón PCR-A a la solución de reacción de PCR, digestión enzimática, marcaje enzimático o secuenciación (si el tampón PCR-A es inferior a 100 ul, añadir 100 ul); mezcle bien y transfiera a una placa de preparación de ADN 96-bien, encienda y ajuste la presión negativa a -25-30 pulgadas Hg, y aspire lentamente la solución en la placa.
2. Agregue 0.3 ml de tampón W2 y absorba la solución. Lave dos veces con 0.3 ml de tampón W2 de la misma manera.
Confirme la adición de etanol absoluto al volumen indicado de Buffer W2 concentrado en la botella de reactivo.
3. Mantenga la presión negativa y extraiga la placa de preparación de ADN de 96-pocillos durante 10 minutos.
4. Moler la placa de preparación de ADN de 96-pocillos 6 veces sobre el tejido fibroso largo con el tubo de drenaje hacia abajo.
5. Coloque la placa de preparación de ADN de 96-pocillos en una placa en forma de V de 96-pocillos, agregue 25-30ul de agua o eluya al centro de la membrana y deje reposar durante 1 minuto. a temperatura ambiente. El ADN se eluyó mediante centrifugación a 3 000 xg durante 5 min.
B. Centrífugo
1. Agregue 3 volúmenes de Buffer PCR-A (si el Buffer PCR-A es inferior a 100 ul, agregue 100 ul) a las reacciones de PCR, digestión, marcaje enzimático o secuenciación; mezcle y transfiera a 96-bien de ADN en 96-placa de preparación de pozos. Coloque la placa de preparación de ADN en una placa de pocillos profundos 96-pocillos de 1,6 ml, centrifugue a 1000 xg durante 1 min y deseche el filtrado.
2. En una placa de preparación de ADN de 96-pocillos, agregue 0,3 ml de tampón W2, centrifugue a 1000xg durante 1 minuto y deseche el filtrado. Lavar de nuevo de la misma manera con 0,3 ml de tampón W2. Confirme la adición de etanol absoluto al volumen indicado de Buffer W2 concentrado en la botella de reactivo.
3. Coloque la placa de preparación de ADN de 96-pocillos en una placa de pocillos profundos de 96-pocillos de 1,6 ml y centrifugue a 3 000×g durante 10 minutos.
4. Coloque la placa de preparación de ADN de 96-pocillos en una placa inferior en forma de V de 96-pocillos limpia, agregue 25-30ul de agua o eluya al centro de la membrana y deje reposar durante 1 minuto a temperatura ambiente. El ADN se eluyó mediante centrifugación a 3 000 xg durante 5 min.
Los fabricantes de tubos octales de PCR hablan de asuntos que requieren atención:
1. Calentar el eluyente o el agua a 65 grados puede ayudar a mejorar la eficiencia de elución.
2. Las moléculas de ADN son ácidas, se recomienda almacenarlas en Tris-HCl 2,5 mM, pH 8,5 eluato.