El medio de cultivo celular es la base nutritiva para imitar artificialmente el entorno de crecimiento in vivo de las células animales y mantener la supervivencia y proliferación de las células in vitro. un nutriente Entonces, ¿cuáles son los problemas comunes que se encuentran en el uso del medio de cultivo celular? Hagamos un análisis.
1. Selección del sistema tampón y cambio de pH del medio de cultivo celular
Dado que el pH óptimo para la mayoría de las células está entre 7.0 y 7.4, las desviaciones de este rango pueden tener efectos nocivos en el crecimiento celular. Sin embargo, los requisitos de pH de varias células no son exactamente los mismos. Las células cultivadas primarias generalmente tienen poca tolerancia a las fluctuaciones de pH, mientras que infinitas líneas celulares tienen una gran tolerancia. Por tanto, en el cultivo primario, el sistema tampón en el medio de cultivo es más importante. El medio de cultivo celular general usa un sistema salino balanceado, pero diferentes medios de cultivo o la misma serie de medios de cultivo usan diferentes sistemas salinos balanceados. Por ejemplo, la serie 199 y la serie MEM tienen el medio de cultivo del sistema de Hanks y el cultivo del sistema de Earle. base. Algunos medios no son el sistema salino equilibrado convencional mencionado anteriormente, como el medio RPMI1640, el medio F12. El sistema salino balanceado del medio bajo en suero MEM tampoco es un sistema salino balanceado convencional, y la capacidad amortiguadora del sistema salino balanceado es más fuerte que la del sistema salino balanceado convencional.
cultivo de células
Hay muchas razones para la caída del pH durante el cultivo celular. Cuando las células crecen muy rápido, el valor del pH suele caer rápidamente, lo que se puede solucionar con un paso oportuno, aumentando la relación de paso o reduciendo el volumen de suero. Además, el ajuste excesivo de la tapa de la botella de cultivo, la capacidad de amortiguación insuficiente del sistema de amortiguación de NaHCO3, la concentración incorrecta de sal en el medio de cultivo, la contaminación bacteriana, por levaduras o por hongos también pueden hacer que el pH baje rápidamente. En este momento, puedes resolverlo de las siguientes maneras:
1) Aumentar la concentración de NaHCO3 en el medio de cultivo o disminuir la concentración de CO2 en la incubadora. Cuando el contenido de NaHCO3 está entre 2.0 g/L y 3,7 g/L, la concentración de CO2 correspondiente es del 5 al 10 por ciento;
2) Cambiar a un medio de cultivo independiente de CO2-;
3) Afloje correctamente la tapa de la botella. Agregue tampón HEPES al medio de cultivo para lograr una concentración final de 10-25 mM;
4) Usar la solución de cultivo basada en la sal de Earle en el ambiente de cultivo de CO2, y usar la solución de cultivo preparada por la sal de Hanks en el ambiente de cultivo atmosférico;
5) Deseche el cultivo o esterilice con antibióticos si la contaminación es la causa.
2. Varios aditivos importantes se usan comúnmente en medios de cultivo celular y problemas a los que se debe prestar atención en el proceso de uso
El rojo de fenol se utiliza como indicador de pH en medios de cultivo celular. En general, el valor de pH del medio se puede juzgar por el efecto indicador del rojo de fenol, pero el contenido de rojo de fenol en un medio de cultivo celular bajo en suero o sin suero es diferente del medio de cultivo celular común y no se puede observar. a simple vista o El valor de pH se determina empíricamente, y se recomienda utilizar un medidor de pH para la medición. Por lo general, el rojo de fenol no tiene un efecto significativo en la calidad de los productos biológicos producidos en medios de cultivo celular que contienen suero y también puede eliminarse mediante técnicas de purificación, pero el rojo de fenol puede causar un desequilibrio intracelular de sodio/potasio en medios de cultivo celular sin suero. , afectando el crecimiento celular.
placa de cultivo celular
El bicarbonato de sodio se utiliza principalmente como sistema tampón en el medio de cultivo celular y también tiene el efecto de regular la presión osmótica. Por lo general, la cantidad recomendada de bicarbonato de sodio en las instrucciones de uso del producto es una cantidad estándar y segura, que se obtiene en base a la experiencia práctica sobre una base científica. Sin embargo, debido a diferentes líneas celulares (cepas), la misma célula puede adaptarse a diferentes entornos (diferente tolerancia celular, etc.) y existen diferencias regionales en la calidad del agua, etc., que también pueden modificarse ligeramente en la producción real. proceso, sino el uso de aquellos que necesitan hacer las pruebas correspondientes (pruebas fisicoquímicas y de producción celular, etc.).
HEPES es un tampón no iónico con buena capacidad de amortiguación en el rango de pH de 7,2 a 7,4 y puede ser tóxico para algunas células en concentraciones altas. El tampón HEPES se puede utilizar con niveles bajos de carbonato de sodio (00,34 g/L) para compensar el aumento de la presión osmótica provocado por la adición de HEPES adicional. Su rango de concentración seguro es de 10 ~ 25mmol/L.
El piruvato de sodio se puede utilizar como fuente de carbono alternativa en el cultivo celular y, aunque las células prefieren la glucosa como fuente de carbono, las células también pueden metabolizar el piruvato de sodio en ausencia de glucosa.
La glutamina es muy inestable en solución. Se puede descomponer al 50 por ciento a 4 grados durante 1 semana. Lo mejor es prepararlo por separado en uso, guardarlo en un refrigerador de -20 grados y agregarlo al medio de cultivo celular antes de usarlo.
